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淺看多態性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法及特點

日期:2022-04-27瀏覽:1294次

 
  多態性試劑盒(PCR-RLFP)引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
  多態性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法:
  一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
  1、注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA段作為陽性對照。
  2、標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
  3、用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
  4、在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
  5、換槍頭,在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
  6、換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
  7、重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
  多態性試劑盒(PCR-RLFP)具有下列特點:
  1、根據指標的保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
  2、靈敏度比常規PCR高2-3個數量級,可以達到幾百拷貝/反應。
  3、即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準確快速。
  4、一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
  5、本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
  6、本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

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