大鼠骨骼肌組織提取物?操作流程

大鼠骨骼肌組織提取物操作流程：

1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：

1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。

1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。

1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀(guān)察 在倒置顯微鏡下觀(guān)察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。

1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀(guān)察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。

1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 

1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

ME-180(人子宮頸表皮癌細(xì)胞)

MFC(小鼠胃癌細(xì)胞)

MG-63(人骨肉瘤細(xì)胞)

MGC80-3(人胃癌細(xì)胞)

MLTC-1(小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞)

Molt-4(人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞)

MRC-5(人胚肺成纖維細(xì)胞 )

MS1(小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞)

MSTO-211H(人肺癌細(xì)胞)

NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)

NCI-H1299(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

NCI-H1650(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

NCI-H292(人肺癌細(xì)胞)

Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞)

NCI-N87(人胃癌細(xì)胞)

NG108-15(小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞)

NIH/3T3(小鼠胚胎細(xì)胞)

NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)

NRK(大鼠腎細(xì)胞)

NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞)

OK(負(fù)鼠腎小管細(xì)胞)

OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞)

OS-RC-2(人腎癌細(xì)胞)

OVCAR-3(人卵巢癌細(xì)胞)

P19(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)

P388D1(小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞)

P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)