歡迎訪問上海研生實業有限公司網站

      返回首頁|聯系我們

      全國統一服務熱線:

      15201736385
      技術文章您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 大鼠骨骼肌組織提取物?操作流程

      大鼠骨骼肌組織提取物?操作流程

      日期:2022-10-13瀏覽:1215次

      大鼠骨骼肌組織提取物操作流程:

      1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。

      1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:

      1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。

      1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。

      1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。

      1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。

      1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。 

      1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線。

      ME-180(人子宮頸表皮癌細胞)

      MFC(小鼠胃癌細胞)

      MG-63(人骨肉瘤細胞)

      MGC80-3(人胃癌細胞)

      MLTC-1(小鼠睪丸間質細胞瘤細胞)

      Molt-4(人急性淋巴母細胞白血病細胞)

      MRC-5(人胚肺成纖維細胞 )

      MS1(小鼠胰島內皮細胞)

      MSTO-211H(人肺癌細胞)

      NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細胞)

      NCI-H1299(人非小細胞肺癌細胞)

      NCI-H1650(人非小細胞肺癌細胞)

      NCI-H292(人肺癌細胞)

      Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經瘤細胞)

      NCI-N87(人胃癌細胞)

      NG108-15(小鼠神經細胞瘤與大鼠神經膠質瘤之融合細胞)

      NIH/3T3(小鼠胚胎細胞)

      NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)

      NRK(大鼠腎細胞)

      NRK-52E(大鼠腎小管導管上皮細胞)

      OK(負鼠腎小管細胞)

      OP9(小鼠骨髓基質細胞)

      OS-RC-2(人腎癌細胞)

      OVCAR-3(人卵巢癌細胞)

      P19(小鼠畸胎瘤細胞)

      P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)

      P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細胞)


      上一篇:海藻百伯史坦菌PCR檢測試劑盒?注意事項

      下一篇:兔粒細胞集落刺激因子ELISA試劑盒注意事項

      在線客服 聯系方式 二維碼

      服務熱線

      021-59989018

      掃一掃,關注我們